Kolom Kromatografi Dan Prinsip Kerjanya

 “KOLOM KROMATOGRAFI DAN PRINSIP KERJANYA”

 

Hi Chems!

Kalian pernah dengar istilah kromatografi gak sih? Kira-kira kalian tahu gak, arti dari kromatografi itu apa? 

Yuk, belajar sama-sama!

Kromatografi adalah istilah yang digunakan untuk menggambarkan metode pemisahan dua atau lebih senyawa dengan cara distribusi senyawa tersebut di antara fase gerak dan fase diam. Berdasarkan instrumennya, kromatografi terbagi menjadi dua jenis yaitu kromatografi modern dan konvensional. 

Kromatografi modern digunakan untuk memisahkan komponen zat-zat aktif dari suatu senyawa yang memiliki berat molekul tinggi menggunakan instrumen yang canggih. Alat yang digunakan diantaranya HPLC (High Performance Liquid Chromatography) dan GC-MS (Gas Chromatography – Mass Spektro).

Kromatografi konvensional merupakan teknik pemisahan dengan menggunakan instrumen sederhana, diantaranya kromatografi kertas, kromatografi kolom, dan kromatografi lapis tipis. 

Di pembahasan kali ini, kita akan fokuskan membahas mengenai kolom kromatografi dan prinsip kerjanya, yuk simak bareng-bareng ^^ ! 


Mengenal Kromatografi Kolom

Kromatografi kolom terbagi menjadi dua jenis, yaitu kromatografi kolom tertutup dan kromatografi terbuka (konvensional). Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom sebagai alat untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran.

Kromatografi kolom menggunakan alat berupa kolom yang terbuat dari gelas atau kaca yang ditempatkan secara vertikal sehingga zat dapat turun secara perlahan dengan bantuan gravitasi. Pada kolom tersebut juga dilengkapi dengan kran (stopcock) yang berfungsi untuk mengalirkan fasa gerak atau eluen sehingga dapat ditampung menggunakan wadah seperti flakon.



1.     Kromatografi Kolom Adsorpsi

Kromatografi kolom terbuka atau kromatografi adsorpsi adalah kromatografi kolom sederhana yang pengaliran pelarut pembilasnya dengan gaya gravitasi, dapat dilakukan di setiap laboratorium analisis dengan alat sederhana (kolom kapiler atau disebut juga kolom terbuka). 

Kromatografi cair-padat atau juga disebut kromatografi adsorpsi (serapan), banyak digunakan dalam pemisahan senyawa-senyawa organik, senyawa-senyawa non polar dan konstituen-konstituen yang sulit untuk menguap. Metode ini banyak digunakan dalam analisis biokimia dan organik.

Pemisahan kromatografi kolom adsorpsi didasarkan pada adsorpsi komponen-komponen campuran dengan afinitas berbeda-beda terhadap permukaan fase diam. Teknik pelaksanaannya dilakukan dengan kolom. Sebagai fasa diam di dalam kolom dapat dipilih silika gel atau alumina.

 

Faktor yang Mempengaruhi Kecepatan Gerak Zat:

a.     Daya serap adsorben

b.     Sifat pelarut

c.     Suhu sistem kromatografi.

Faktor yang Mempengaruhi Kecepatan Turunnya Sampel:

a.     Tekanan di dalam kolom semakin besar semakin cepat

b.     Panjang adsorben, makin panjang makin cepat turunnya senyawa

c.     Ukuran partikel adsorben

d.     Rongga udara dalam adsorben

e.     Jika ada rongga udara dalam adsorben maka jalannya senyawa akan terganggu.

 



2.     Kromatografi Kolom Partisi

 Cara basah yaitu silika gel terlebih dahulu disuspensikan dengan cairan pengelusi yang akan     digunakan kemudian dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom secara kontinyu sedikit demi sedikit hingga masuk semua, sambil kran kolom dibuka. Eluen dialirkan hingga silika gel mapat, setelah silika gel mapat eluen dibiarkan mengalir sampai batas adsorben kemudian kran ditutup dan sampel dimasukkan yang terlebih dahulu dilarutkan dalam eluen sampai diperoleh kelarutan yang spesifik. Kemudian sampel dipipet dan dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom sedikit demi sedikit hingga masuk semua, dan kran dibuka dan diatur tetesannya, serta cairan pengelusi ditambahkan. Tetesan yang keluar ditampung sebagai fraksi-fraksi.

 

Kolom dapat dibuat dari berbagai jenis material, seperti stainless steel, aluminium, tembaga, gelas dan paduan silika. Sebagian besar sistem kolom modern terbuat dari gelas atau paduan silika. Kolom konvensional dibuat dari material pendukung yang dilapisi fase diam dari berbagai pembebanan yang dikemas di dalam kolom. Kolom kapiler terdiri dari tabung kapiler panjang yang di dalamnya dilapisi dengan fase diam (fase diam dapat juga direkatkan langsung pada permukaan silika). Sebagian besar kolom kapiler terbuat dari paduan silika yang dilapisi polimer di bagian luarnya. Paduan silika sangat mudah pecah sedangkan lapisan polimer tersebut bertindak sebagai pelindungnya (Seno, 1997).


 

Cara Pembuatan Kromatografi Kolom

Cara pembuatannya ada dua macam (Hargono, 1986): 

1.     Cara kering yaitu silika gel dimasukkan ke dalam kolom yang telah diberi kapaskemudian ditambahkan cairan pengelusi.

 

2.     Cara basah yaitu silika gel terlebih dahulu disuspensikan dengan cairan pengelusi yangakan digunakan kemudian dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom secarakontinyu sedikit demi sedikit hingga masuk semua, sambil kran kolom dibuka. Eluen dialirkan hingga silika gel mapat, setelah silika gel mapat eluen dibiarkan mengalir sampai batas adsorben kemudian kran ditutup dan sampel dimasukkan yang terlebih dahulu dilarutkan dalam eluen sampai diperoleh kelarutan yang spesifik. Kemudian sampel dipipet dan dimasukkan ke dalam kolom melalui dinding kolom sedikit demi sedikit hingga masuk semua, dan kran dibuka dan diatur tetesannya, serta cairan pengelusi ditambahkan. Tetesan yang keluar ditampung sebagai fraksi-fraksi.

 

Kolom dapat dibuat dari berbagai jenis material, seperti stainless steel, aluminium, tembaga, gelas dan paduan silika. Sebagian besar sistem kolom modern terbuat dari gelas atau paduan silika. Kolom konvensional dibuat dari material pendukung yang dilapisi fase diam dari berbagai pembebanan yang dikemas di dalam kolom. Kolom kapiler terdiri dari tabung kapiler panjang yang didalamnya dilapisi dengan fase diam (fase diam dapat juga direkatkan langsung pada permukaan silika). Sebagian besar kolom kapiler terbuat dari paduan silika yang dilapisi polimer di bagian luamya. Paduan silika sangat mudah pecah sedangkan lapisan polimer tersebut bertindak sebagai pelindungnya (Seno, 1997).

 
Prinsip Kerja Kromatografi Kolom

Prinsip kerja kromatografi kolom adalah dengan adanya perbedaan daya serap dari masing-masing komponen, campuran yang akan diuji, dilarutkan dalam sedikit pelarut lalu dimasukkan lewat puncak kolom dan dibiarkan mengalir kedalam zat menyerap. Senyawa yang lebih polar akan terserap lebih kuat sehingga turun lebih lambat dari senyawa non polar terserap lebih lemah dan turun lebih cepat. Zat yang diserap dari larutan secara sempurna oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada kolom. Pelarut lebih lanjut / dengan tanpa tekanan udara masing-masing zat akan bergerak turun dengan kecepatan khusus sehingga terjadi pemisahan dalam kolom (Seno, 1997).

 

Nah, dari pembahasan di atas para chems jadi makin tau kan tentang kolom kromatografi dan prinsip kerjanya, cuss tinggal praktekin aja deh di lab hehe. Okey, sampai sini dulu yah pembahasan kita, jangan lupa untuk terus staytune pembahasan selanjutnya di blog kami ^^ ! 


Lokasi: Jl. Ir H. Juanda No.95, Ciputat, Kec. Ciputat Tim., Kota Tangerang Selatan, Banten 15412, Indonesia

Komentar

Posting Komentar

Postingan populer dari blog ini

Anak Kimia Wajib Tahu MSDS!

Gambar
  Dalam bekerja harus mengutamakan kesehatan dan keselamatan, tidak terkecuali bagi seorang kimiawan yang mana selalu berkaitan dengan percobaan yang dilakukan di laboratorium. Melalui kondisi kesehatan dan keselamatan kerja yang baik kimiawan dapat melaksanakan percobaan dengan aman, nyaman, dan efisien. Setiap peneliti/praktikan yang bekerja berhak mendapat jaminan kesehatan dan keselamatan kerja baik secara fisik maupun psikologis, serta perlengkapan dan peralatan kerja yang mumpuni, agar terhindar dari kecelakaan saat melakukan penelitian. Adanya prosedur kesehatan dan keselamatan kerja digunakan agar setiap peneliti/praktikan dapat bekerja secara sehat dan selamat tanpa membahayakan diri sendiri atau orang lain. Indikator keberhasilan dalam penerapan prosedur kesehatan dan keselamatan kerja bisa dilihat dari banyak atau sedikitnya kasus-kasus kecelakaan kerja yang terjadi. Sehingga semakin sedikit kasus kecelakaan yang terjadi atau zero accident artinya penerapan prosedur kes...
Read more »
Gambar
  Mengapa Es Dapat Mengapung di Air? Molekul-molekul dalam es terpisah lebih jauh daripada molekul-molekul dalam air. Oleh karena itu, es kurang padat dibandingkan air cair dan karenanya dapat mengapung. Es adalah senyawa yang tersusun dari molekul H2O yang disusun sedemikian rupa sehingga 1 atom H terletak pada satu sisi di antara sepasang atom oksigen dari molekul air lainnya, membentuk segi enam simetris.  Satu molekul H2O dapat mengikat 4 molekul H2O yang berdekatan, dan jarak antara atom O-O yang berdekatan adalah 2,76 Å. Rongga pada kristal es berbentuk sedemikian rupa sehingga membentuk banyak saluran. Oleh karena itu, es lebih besar dan kurang padat dibandingkan bentuk cairnya, sehingga es dapat mengapung di air. Gambar Kerapatan Air Lebih Besar dari pada Es Es adalah air padat yang terdiri dari jaringan terbuka molekul H2O yang disatukan oleh ikatan hidrogen. Jaringan es ini sangat terbuka, sehingga jika es mencair, ikatan hidrogennya putus, menghasilkan air yang lebi...
Read more »

Tahukah Kalian, Mengapa Sabun Dapat Membersihkan Minyak dan Kotoran?

Gambar
Sabun merupakan bahan yang dipakai untuk mencuci, baik pakaian, perabotan, badan, dan lain-lain yang terbuat dari campuran alkali (natrium atau kalium hidroksida), dan trigliserida dari asam lemak rantai karbon C 16 . Sabun dibuat secara kimia melalui proses reaksi saponifikasi atau disebut juga reaksi penyabunan. Dalam proses ini asam lemak akan terhidrolisis oleh basa membentuk gliserin dan sabun mentah. Sabun tersebut kemudian akan diolah kembali untuk menyempurnakannya hingga kemudian sampai ke pemakai (Jongko, 2009). Sabun juga merupakan senyawa natrium dengan asam lemak yang dipakai untuk membersihkan tubuh, pakaian, alat masak, dan lainnya. Sabun memiliki bentuk yang padat dan ada juga yang cair, dengan busa atau tanpa zat tambahan lain serta tidak menimbulkan iritasi terhadap kulit. Penyusun utama pembuatan sabun terdiri dari asam lemak dan garam sodium atau potasium. Asam lemak yang berikatan dengan garam sodium (NaOH) akan menghasilkan sabun padat ( hard soap ), sedangkan asa...
Read more »